Los protocolos para
la obtención del antígeno humano puro son laboriosos y de bajo rendimiento y
requieren riñones de cadáveres. El Recombinante alfa 3 (IV) NC1 producida en E.
coli ha sido insoluble y mal reconocida por autoanticuerpos de los pacientes. Se
ha utilizado el sistema de expresión de baculovirus para producir el antígeno
como un producto soluble en células Sf9. Un vector de transferencia se
construye a partir de ADNc que codifican el péptido líder, terminal NH2 y 7 S
dominio de la alfa humana 1 cadena de colágeno tipo IV y se unió inframe al
dominio NC1 y extremo COOH de la cadena alfa humana 3 bajo el control de el
promotor de la polihedrina. Esto
codifica una cadena híbrida "mini"-colágena de la que ha sido
la mayoría de la región central helicoidal triple eliminada.
El antígeno recombinante se ve en la electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida y las transferencias Western de sobrenadantes a su tamaño molecular predicho de 41 kDa y como dímeros de 82 kDa.
No reaccionaron fuertemente con anticuerpos humanos por parte de
inmunoensayo Western Blot. La enzima ligada, inhibió la unión de autoanticuerpos a GBM humano, y ató dos anticuerpos monoclonales conocidos a reconocer la alfa 3 (IV) NC1.
Estas moléculas recombinantes deben resultar muy valiosas para el estudio in vitro de la inmunopatogénesis de la enfermedad de Goodpasture, y el enfoque proporciona un medio por el cual las interacciones entre las cadenas de tipo diferentes de colágeno IV que se encuentran en GBM podría ser estudiado in vitro
El antígeno recombinante se ve en la electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida y las transferencias Western de sobrenadantes a su tamaño molecular predicho de 41 kDa y como dímeros de 82 kDa.
No reaccionaron fuertemente con anticuerpos humanos por parte de
inmunoensayo Western Blot. La enzima ligada, inhibió la unión de autoanticuerpos a GBM humano, y ató dos anticuerpos monoclonales conocidos a reconocer la alfa 3 (IV) NC1.
Estas moléculas recombinantes deben resultar muy valiosas para el estudio in vitro de la inmunopatogénesis de la enfermedad de Goodpasture, y el enfoque proporciona un medio por el cual las interacciones entre las cadenas de tipo diferentes de colágeno IV que se encuentran en GBM podría ser estudiado in vitro
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